FITC標記抗體七大流程

2017-09-07 16:17:13      點擊:

FITC標記抗體七大流程:

  流程一: 將待交聯的蛋白(濃度31mg/mL)對交聯反應液透析三次4℃,至pH=9.0。交聯反應液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。

  流程二:將FITC溶于DMSO中,濃度為1mg/mL。每次交聯使用的FITC均應新鮮配制,避光。

  流程三: 按P:F(蛋白質:FITC)=1mg:150μg 的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中,邊加邊輕輕晃動使其與抗體混合均勻,暗處4℃反應8h。

  流程四:加入5mol/L的NH4Cl至終濃度50mmol/L,4℃終止反應2h。

  流程五: 將交聯物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。

  流程六:交聯物的鑒定

  蛋白濃度(mg/mL) = [ A280– 0.31×A495 ] / 1.4

  F/P比例: 3.1×A495 / [A280 – 0.31×A495 ],該值應介于2.5~6.5之間。

  流程七:FITC交聯的蛋白應置于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃避光保存。

來源:昀輝科技 http://www.wavenm.com/

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